血清尿素测定的方法有二乙酰一肟法、脲酶-波氏比色法、酶偶联速率法等。
1、二乙酰一肟法:
二乙酰在强酸条件下与尿素缩合成红色的4,5-二甲基-2-氧咪唑化合物,颜色深浅与尿素含量成正比。因二乙酰不稳定,故由试剂中二乙酰一肟与强酸作用产生二乙酰。
2、脲酶-波氏比色法:
脲酶水解尿素产生2分子氨和1分子二氧化碳,氨在碱性介质中与苯酚及次氯酸钠反应,生成蓝色的吲引哚酚阴离子,此过程需用亚硝基铁氰化钠催化反应。蓝色吲哚酚的生成量与尿素含量成正比,在630m波长处有吸收峰。
3、酶偶联速率法:
尿素经脲酶催化水解生成2分子氨及1分子二氧化碳,在谷氨酸脱氢酶催化下,氨与α-酮戊二酸还原型辅酶Ⅰ作用生成谷氨酸与氧化型辅酶Ⅰ。还原型辅酶Ⅰ在340m波长处有吸收峰,其吸光度下降的速率与待测样品中尿素的含量成正比。